賽默飛7500實時熒光定量PCR儀詳細(xì)介紹

一、儀器概述

賽默飛7500實時熒光定量PCR儀（Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System）是一款應(yīng)用廣泛的核酸定量分析平臺，基于熒光檢測技術(shù)對PCR擴(kuò)增過程中的目標(biāo)核酸進(jìn)行實時監(jiān)控與分析。該系統(tǒng)整合了精準(zhǔn)的溫控模塊、靈敏的光學(xué)檢測系統(tǒng)以及成熟的數(shù)據(jù)分析軟件，適用于科研、臨床、食品安全、環(huán)境監(jiān)測等多個領(lǐng)域。

該儀器采用5通道光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計，支持多重PCR反應(yīng)，可以同時檢測多種靶標(biāo)，提高了實驗效率。在操作流程方面，設(shè)備配合用戶友好的軟件平臺，使整個實驗從設(shè)計、運行到數(shù)據(jù)分析更加系統(tǒng)化和直觀。

二、技術(shù)參數(shù)

1. 光學(xué)系統(tǒng)

• 5個獨立熒光通道，支持FAM、VIC、SYBR Green、ROX、TAMRA等多種常用熒光染料

• 高性能CCD檢測器，具備高靈敏度和信號線性響應(yīng)

• 高效濾光片切換機(jī)制，確保信號采集的準(zhǔn)確性與重復(fù)性

2. 溫控系統(tǒng)

• 基于Peltier元件的溫控模塊

• 升降溫速率約為1.6℃/秒

• 控溫精度為±0.25℃，保證擴(kuò)增過程的穩(wěn)定性

3. 樣本通量

• 標(biāo)準(zhǔn)96孔板格式，支持多種通用PCR耗材

• 單次運行可同時處理96個反應(yīng)體系，適合中等通量的實驗需求

4. 反應(yīng)體積

• 推薦反應(yīng)體積：10–30 μL

• 支持多種體積設(shè)定，滿足不同試劑體系要求

5. 軟件功能

• Applied Biosystems SDS軟件支持定量分析、相對定量、基因表達(dá)分析、熔解曲線分析等

• 數(shù)據(jù)輸出格式多樣，便于與其他數(shù)據(jù)平臺對接

• 實驗過程實時監(jiān)控，提供擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和Ct值信息

三、主要功能和應(yīng)用場景

1. 絕對定量與相對定量分析

• 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線建立靶基因的濃度與Ct值之間的關(guān)系，實現(xiàn)準(zhǔn)確定量

• 在無標(biāo)準(zhǔn)品情況下，通過內(nèi)參基因?qū)Ρ葘崿F(xiàn)相對定量

2. 基因表達(dá)分析

• 應(yīng)用于轉(zhuǎn)錄水平研究，可對不同條件下的基因表達(dá)水平變化進(jìn)行監(jiān)測

• 配合高質(zhì)量引物設(shè)計和反轉(zhuǎn)錄體系，提高表達(dá)分析準(zhǔn)確度

3. SNP分析和基因分型

• 利用TaqMan探針技術(shù)進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性檢測

• 可進(jìn)行等位基因識別和樣本分型，適合遺傳研究和個體化醫(yī)學(xué)

4. 病原體檢測與載量分析

• 適用于臨床診斷實驗室中對病毒、細(xì)菌等病原體的快速檢測

• 能在早期感染階段提供檢測依據(jù)，有助于疾病預(yù)警與防控

5. 食品與環(huán)境檢測

• 檢測轉(zhuǎn)基因成分、致病菌殘留、過敏源等

• 在水質(zhì)檢測、土壤微生物分析等環(huán)保項目中也有良好適應(yīng)性

四、操作流程簡介

1. 樣品準(zhǔn)備

• 提取DNA或RNA樣品并進(jìn)行質(zhì)量評估

• 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（如有需要），合成cDNA

2. 反應(yīng)體系配制

• 配制PCR反應(yīng)液，包括引物、探針、酶、緩沖液和模板

• 分裝入96孔板，封板后離心去除氣泡

3. 儀器設(shè)置與運行

• 打開SDS軟件，設(shè)定擴(kuò)增程序和檢測通道

• 加載樣本并啟動反應(yīng)程序

4. 數(shù)據(jù)分析

• 采集并分析擴(kuò)增曲線，獲取Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線

• 導(dǎo)出分析報告，進(jìn)一步做統(tǒng)計或圖表處理

五、優(yōu)勢特點

1. 操作界面直觀
   軟件操作簡潔，實驗流程明晰，有助于新手快速掌握使用技巧。

2. 結(jié)果可靠性高
   儀器具備良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，適用于長期批量實驗。

3. 多通道檢測
   一次運行可完成多重靶標(biāo)檢測，節(jié)約時間和樣本資源。

4. 維護(hù)便捷
   設(shè)備結(jié)構(gòu)設(shè)計合理，日常維護(hù)工作量小，延長使用壽命。

六、維護(hù)與注意事項

1. 日常維護(hù)

• 定期擦拭光學(xué)部件，防止塵埃影響信號檢測

• 避免強(qiáng)光直射儀器，保持室內(nèi)恒溫環(huán)境

• 檢查Peltier元件工作狀態(tài)，避免過載運行

2. 使用注意事項

• 正確選擇熒光染料和通道，避免信號交叉干擾

• 使用專用PCR耗材，確保熱傳導(dǎo)與熒光透明度

• 實驗前做好模板與反應(yīng)體系的充分混勻，減少誤差

七、適用領(lǐng)域舉例

• 醫(yī)學(xué)研究：腫瘤標(biāo)志物、病毒檢測、突變篩查

• 分子生物學(xué)：基因表達(dá)調(diào)控、功能基因篩選

• 農(nóng)業(yè)科學(xué)：轉(zhuǎn)基因檢測、病害早期監(jiān)控

• 法醫(yī)學(xué)：DNA指紋、樣本溯源分析

八、結(jié)語

賽默飛7500實時熒光定量PCR儀在多個科研和應(yīng)用領(lǐng)域中展現(xiàn)出良好的性能表現(xiàn)，其穩(wěn)定的檢測平臺和完善的數(shù)據(jù)處理功能為用戶提供了可靠的核酸檢測方案。盡管隨著技術(shù)的發(fā)展，更新型號不斷推出，但7500系統(tǒng)依然憑借其成熟的設(shè)計和廣泛的用戶基礎(chǔ)，在眾多實驗室中發(fā)揮著重要作用。